Modulation of thyroid hormone receptors, TRα and TRβ, by using different doses of triiodothyronine (T3) at different times / Modulação dos receptores de hormônio tireoidiano, TRα e TRβ, utilizando diferentes doses de triiodotironina (T3) em diferentes tempos

OBJECTIVE: To examine the effect of different doses of triiodothyronine (T3) on mRNA levels of thyroid hormone receptors, TRα and TRβ, at different times. MATERIALS AND METHODS: 3T3-L1 adipocytes were incubated with T3 (physiological dose: F; supraphysiological doses: SI or SII), or without T3 (control, C) for 0.5, 1, 6, or 24h. TRα and TRβ mRNA was detected using real-time polymerase chain reaction. RESULTS: F increased TRβ mRNA levels at 0.5h. After 1h, TRα levels increased with F and SI and TRβ levels decreased with SII compared with C, F, and SI. After 6h, both genes were suppressed at all concentrations. In 24h, TRα and TRβ levels were similar to those of C group. CONCLUSIONS: T3 action with F began at 1h for TRα and at 0.5h for TRβ. These results suggest the importance of knowing the times and doses that activate T3 receptors in adipocytes.

OBJETIVO: Examinar o efeito de diferentes doses de triiodotironina (T3) sobre a expressão gênica dos receptores TRα e TRβ em diferentes tempos. MATERIAIS E MÉTODOS: Adipócitos, 3T3-L1, foram incubados com T3 nas doses fisiológica (F, 10nM) e suprafisiológicas (SI, 100nM ou SII, 1000nM) ou veículo (controle, C) durante 0,5, 1, 6 ou 24h. mRNA dos TRs foram detectados utilizando PCR em tempo real. RESULTADOS: Níveis de TRβ aumentaram em F em 0,5h. Após 1h, níveis de TRα aumentaram em F e SI comparado ao C, enquanto TRβ diminuiu no SII comparado com C, F, e SI. Após 6h, ambos os genes foram suprimidos em todas concentrações. Em 24h, níveis de TRα e TRβ retornaram aos do C. CONCLUSÕES: Ação do T3 em F iniciou-se em 1h para TRα e 0,5h para TRβ. Esses resultados são importantes para determinar tempo inicial e dose de T3 em que os receptores de HT são ativados em adipócitos.

Perfil dos hormônios da tireoide em pacientes com câncer de mama em estado de menopausa / Thyroid hormone profile in breast cancer patients in postmenopause

OBJETIVO: Verificar o perfil dos hormônios tireóideos (HTs) em pacientes pós-menopausa portadoras de carcinoma de mama (CaM). SUJEITOS E MÉTODOS: Participaram 12 pacientes com CaM em estádio I ou II sem intervenções que pudessem interferir na progressão tumoral e um grupo controle com 18 pacientes em pós-menopausa sem CaM. Foram dosados os níveis séricos de anticorpo antitiroperoxidase (TPOAB), hormônio estimulante da tireoide (TSH), tiroxina livre (T4L), estradiol (E2), hormônio folículo estimulante (FSH) e hormônio luteinizante (LH) antes e após a cirurgia, e realizada a imunoistoquímica dos receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR). RESULTADOS: Quatro pacientes com CaM apresentaram alterações do perfil hormonal tireoidiano: dois hipertireoidismo, um hipotireoidismo e positividade TPO-AB, todas com ER e PR positivos. Os níveis de TSH dessas pacientes não foram diferentes dos níveis encontrados no grupo controle (1,89 ± 1,56 vs. 2,86 ± 3,12 mUI/mL), porém os níveis de T4L nas pacientes com CaM foram estatisticamente maiores que o controle (1,83 ± 0,57 vs. 1,10 ± 0,20 ng/dL). CONCLUSÃO: Esses resultados reforçam a necessidade de avaliação do status tireoidiano em pacientes com CaM, uma vez que, na ausência de E2, mudanças clínicas nos HTs podem atuar em vias controladas pelo E2.

OBJECTIVE: The aim of this study was to determine thyroid hormone (TH) profile in postmenopausal patients with breast cancer (BC). SUBJECTS AND METHODS: 12 CaM patients stages I or II, without interventions that could interfere with tumor progression were selected, as well as and a control group with 18 postmenopausal women without CaM. We measured serum anti-thyroperoxidase antibody (TPOAB), thyroid-stimulating hormone (TSH), free thyroxine (T4L), estradiol (E2), follicle-stimulating hormone (FSH), and luteinizing hormone (LH), before and after surgery, besides immunohistochemistry for estrogen (ER) and progesterone (PR) receptors. RESULTS: Four patients with CaM showed changes in thyroid hormone profile: two had hyperthyroidism, one hypothyroidism, and one was positive for TPO-AB. All of them positive for ER and PR. TSH levels in breast cancer patients were not different from levels found in the control group (1.89 ± 1.56 vs. 2.86 ± 3.12 mIU/mL), but the levels of T4L in patients with CaM were statistically higher than those of the control group (1.83 ± 0.57 vs. 1.10 ± 0.20 ng/dL). CONCLUSION: These results reinforce the need for assessment of thyroid status in CaM patients, since in the absence of E2, changes in clinical HTs can act in E2-controlled processes.

Exercício e restrição alimentar aumentam o RNAm de proteínas do trânsito de Ca2+ miocárdico em ratos / Upregulation of mRNA myocardium calcium handling in rats submitted to exercise and food restriction / Ejercicio y restricción alimenticia aumentan el rnam de proteínas del tránsito de Ca2+ miocárdico en ratones

FUNDAMENTO: Treinamento físico (TF) aumenta a sensibilidade dos hormônios tireoidianos (HT) e a expressão gênica de estruturas moleculares envolvidas no movimento intracelular de cálcio do miocárdio, enquanto a restrição alimentar (RIA) promove efeitos contrários ao TF. OBJETIVO: Avaliar os efeitos da associação TF e RIA sobre os níveis plasmáticos dos HT e a produção de mRNA dos receptores HT e estruturas moleculares do movimento de cálcio do miocárdio de ratos. MÉTODOS: Utilizaram-se ratos Wistar Kyoto divididos em: controle (C, n = 7), RIA (R50, n = 7), exercício físico (EX, n = 7) e exercício físico + RIA (EX50, n = 7). A RIA foi de 50 por cento e o TF foi natação (1 hora/dia, cinco sessões/semana, 12 semanas consecutivas). Avaliaram-se as concentrações séricas de triiodotironina (T3), tiroxina (T4) e hormônio tireotrófico (TSH). O mRNA da bomba de cálcio do retículo sarcoplasmático (SERCA2a), fosfolamban (PLB), trocador Na+/Ca+2 (NCX), canal lento de cálcio (canal-L), rianodina (RYR), calsequestrina (CQS) e receptor de HT (TRα1 e TRβ1) do miocárdio foram avaliados por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. RESULTADOS: RIA reduziu o T4, TSH e mRNA do TRα1 e aumentou a expressão da PLB, NCX e canal-L. TF aumentou a expressão do TRβ1, canal-L e NCX. A associação TF e RIA reduziu T4 e TSH e aumentou o mRNA do TRβ1, SERCA2a, NCX, PLB e correlação do TRβ1 com a CQS e NCX. CONCLUSÃO: Associação TF e RIA aumentou o mRNA das estruturas moleculares cálcio transiente, porém o eixo HT-receptor não parece participar da transcrição gênica dessas estruturas.

BACKGROUND: Chronic exercise and food restriction (FR) have directionally opposite changes in transcription of molecular structures of calcium handling and thyroid hormone (TH) status. OBJECTIVE: Evaluate the association of chronic exercise and FR on serum thyroid hormones and gene transcription of molecular structures of intracellular calcium transients and thyroid receptors in myocardium of rats. METHODS: Male Wistar Kyoto rats, divided into two groups: control (C, n = 7), FR (R50, n = 7), chronic exercise (EX, n = 7) and chronic exercise + FR (EX50, n = 7). FR was of 50 percent and exercise was swimming (1 hour/day, 5 days/week, during 12 weeks). Serum concentrations of T3, T4 and TSH were determined. The mRNA gene expression of the sarcoplasmatic reticulum calcium pump (SERCA2a), phospholamban (PLB), Na+/Ca+2 exchanger (NCX), calcium channel L-type (L-channel), ryanodine (RYR), calsequestrin (CQS) and HT receptor (TRα1 and TRβ1) of the myocardium was performed by PCR real-time. RESULTS: FR reduced serum levels of T4 and TSH and TRα1 mRNA and increased the expression of PLB, NCX and L-channel. Exercise increased the TRβ1 receptor, L-channel and NCX. The association of exercise and FR reduced plasma T4 and TSH, TRβ1 mRNA increase, SERCA2a, NCX and PLB, and there was a significant correlation of TRβ1 with CQS and NXC. CONCLUSION: Chronic exercise and food restriction increased the mRNA of transient Ca2+ proteins; however, TH-receptor axis cannot participate in the transcription of mRNA of myocardial calcium transient proteins.

FUNDAMENTO: Entrenamiento físico (EF) aumenta la sensibilidad de las hormonas tiroideas (HT) y la expresión génica de estructuras moleculares envueltas en el movimiento intracelular de calcio del miocardio, mientras que la restricción alimenticia (RA) promueve efectos contrarios al EF. OBJETIVO: Evaluar los efectos de la asociación EF y RA sobre los niveles plasmáticos de los HT y la producción de ARNm de los receptores HT y estructuras moleculares del movimiento de calcio del miocardio de ratones. MÉTODOS: Se utilizaron ratones Wistar Kyoto divididos en: control (C, n = 7), RA (R50, n = 7), ejercicio físico (EX, n = 7) y ejercicio físico + RA (EX50, n = 7). La RA fue de 50 por ciento y el EF fue natación (1 hora/día, cinco sesiones/semana, 12 semanas consecutivas). Se evaluaron las concentraciones séricas de triyodotironina (T3), tiroxina (T4) y hormona tireotrófico (TSH). El ARNm de la bomba de calcio del retículo sarcoplasmático (SERCA2a), fosfolamban (PLB), intercambiador Na+/Ca+2 (NCX), canal lento de calcio (canal-L), rianodina (RYR), calsequestrina (CQS) y receptor de HT (TRα1 y TRβ1) del miocardio fueron evaluados por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real. RESULTADOS: RA redujo el T4, TSH y ARNm del TRα1 y aumentó la expresión de la PLB, NCX y canal-L. EF aumentó la expresión del TRβ1, canal-L y NCX. La asociación EF y RA redujo T4 y TSH y aumentó el ARNm del TRβ1, SERCA2a, NCX, PLB y correlación del TRβ1 con la CQS y NCX. CONCLUSIÓN: Asociación EF y RA aumentó el ARNm de las estructuras moleculares calcio transiente, sin embargo el eje HT-receptor no parece participar de la transcripción génica de esas estructuras.

Influence of estradiol and triiodothyronine on breast cancer cell lines proliferation and expression of estrogen and thyroid hormone receptors / Efeito do estradiol e da triiodotironina na proliferação de linhagens celulares de câncer de mama e na expressão de receptores de estrógeno e hormônio tireoidiano

OBJECTIVE: To better understand the estrogen (E2) agonist action of triiodothyronine (T3) the effects of these hormones on ER negative MDA-MB-231 breast cancer cells were compared with those on S30, a clone of MDA-MB-231 stably transfected with ERα cDNA, in terms of proliferation and modulation of hormone receptors. RESULTS: Growth experiments showed that MDA-MB-231 was not modulated by any hormone or tamoxifen (TAM). Treatment with E2, 10-8M or 10-9M had little effect on S30 proliferation. T3 at 10-8M significantly inhibited proliferation. This effect was not reverted by TAM. Treatments with 10-8M concentration of E2 or T3 reduced ERα gene expression in S30, an effect partially blocked by association with TAM, with no effect on TR expression. These results suggest that, in S30, 10-8M T3 has a similar action to E2 relative to ERα gene modulation. CONCLUSIONS: Such results emphasize the need of determining T3 levels, before the introduction of antiestrogenic forms of treatment in breast cancer patients.

OBJETIVO: Para compreender melhor a ação da triiodotironina (T3) agonista de estrógeno (E2), foram comparados os efeitos destes hormônios em células de câncer de mama MDA-MB-231 ER negativas com um clone de MDA-MB-231, transfectado estavelmente com o cDNA de ERα (S30), em termos de proliferação e modulação dos receptores hormonais. RESULTADOS: Experimentos de crescimento mostraram que MDA-MB-231 não foi modulada por qualquer hormônio ou pelo tamoxifeno (TAM). O crescimento de S30 foi essencialmente inalterado por tratamento com E2 10-9M ou 10-8M, mas T3 10-8M inibiu significativamente a proliferação quando comparada a ambas concentrações de E2. Esse efeito não foi revertido pelo TAM, sugerindo um resultado não genômico, independente de ERE. Tratamentos com 10-8M de E2 ou de T3 reduziram a expressão do gene ERα em S30, efeito parcialmente impedido pela associação com TAM, sem efeito na expressão de TR. Os resultados sugerem que, em S30, T3 10-8M tem ação semelhante ao E2 com relação à modulação do gene ERα. CONCLUSÕES: Esses resultados enfatizam a necessidade de dosagem de T3 circulante antes da introdução do tratamento antiestrogênico no câncer de mama.

Inter-relação da modulação gênica entre triidotironina (T3) e estradiol (E2) em cultura primária de adenocarcinoma de mama / Inter-modulation of the relationship between gene triidotironina (T3) and estradiol (E2) in primary culture of adenocarcinoma of breast

Sabe-se que o E2 e o status hormonal da paciente são importantes para a proliferação e o tratamento do câncer de mama, quanto ao T3, apesar dos estudos epidemiológicos serem ainda contraditórios em relação a sua influência no câncer de mama, estudos laboratoriais demonstram sua capacidade de induzir a sua proliferação e induzir genes que são induzidos por estrógeno. Portanto a hipótese formulada foi que os hormônios tireoidianos modulam a expressão dos mesmos genes que o estrógeno em carcinoma de mama. Para materializar a hipótese o objetivo foi comparar a expressão dos genes TGFA, TGFB1 e PGR, resultantes da ação do estrógeno, e dos genes TNFRSF9, BMP6 e THRA, resultantes da ação do hormônio tireoidiano, combinados ou não com a ação do Tamoxifem, em carcinoma de mama colocado em cultura primária. Foram selecionadas 12 pacientes do sexo feminino, menopausadas, com Carcinoma de Mama estádio grau 1 e 2 , do Hospital do Câncer de São Paulo, verificou-se a existência de disfunção tireoidiana concomitante, através das dosagens laboratoriais de T3L, T4L, TSH, TPO-AB, assim como o status hormonal em relação aos níveis estrogênicos. Fragmentos tumorais obtidos cirurgicamente foram colocados em cultura primária. Essas células foramtratadas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) mais TAM (10-6M), T3 (10-8M) mais TAM (10-6M), TAM (10-6M), com posterior extração de RNA total. Foi utilizada a metodologia de PCR em Tempo Real para verificar a ação do T3 e do E2 em genes normalmente induzidos pelo E2 (PGR, TGFA e TGFB1), verificada a expressão de genes que aumentam (TNFRSF9 e THRA) e diminuem (BMP6) pela ação do T3 em seu receptor (TR) e a presença de mutações no TR. Não foram encontradas mutações envolvendo o receptor de hormônio tireoidiano...